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外周血PBMNC分離及凍存

點(diǎn)擊次數(shù):2370 更新時(shí)間:2017-04-19

PBMNC分離效果

按照GMP生產(chǎn)規(guī)范和臨床ACI要求分離外周血PBMNC,冷凍保存前細(xì)胞活性為99.6%±0.4%n=5,與原始血樣比,PBMNC回收率58.4%±6.52%n=5。

細(xì)菌和真菌培養(yǎng)陰性,實(shí)現(xiàn)全程無(wú)菌處理。

不同冷凍保護(hù)液對(duì)PBMNC的保護(hù)效果不同

PBMNC在-196℃液氮中儲(chǔ)存24個(gè)月后復(fù)蘇,鏡下觀察見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)完整,圓形飽滿,PBMNC復(fù)蘇效率89.7%±3.82%,凍存液中含80%無(wú)血清培養(yǎng)基組和含80%自體血漿組比較,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P≥0.05)(1。

PBMNC凍存后誘導(dǎo)

AIL細(xì)胞的體外增殖及表型分析在倒置顯微鏡下觀察顯示,外周血單個(gè)核細(xì)胞呈懸浮生長(zhǎng),大小均勻,折光性一致,AIL經(jīng)4d培養(yǎng)后部分細(xì)胞明顯增大,可見(jiàn)細(xì)胞集落,胞核密度加強(qiáng),體積增大,胞膜光滑,未見(jiàn)突起,新鮮與凍存后的單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)的AIL在形態(tài)和表型上無(wú)明顯差別,增殖高峰期均在10-12d。

 

在培養(yǎng)過(guò)程中第14天,凍存組AIL細(xì)胞所占相對(duì)百分率由約2.3%上升約為10.4%,細(xì)胞數(shù)增加約1048倍,對(duì)照組AIL所占相對(duì)百分率由約2.3%上升為約11.3%,細(xì)胞數(shù)增加約1105倍。兩組之間在細(xì)胞增長(zhǎng)倍數(shù)與AIL所占百分比無(wú)顯著差異P>0.05。

(表1)

效應(yīng)細(xì)胞的體外細(xì)胞毒活性

新鮮的與凍存的單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)的AIL對(duì)NK敏感K562或非敏感株細(xì)胞HeLa及貼壁或懸浮生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞均顯示出很強(qiáng)的殺傷活性,且該活性隨效靶濃度比的增加而增大,兩組間的細(xì)胞毒活性無(wú)顯著性差異P>0.05)(2。

2比較各種冷凍和對(duì)照組之間的增殖和細(xì)胞表型。A:所有表型培養(yǎng)前。B:所有在冷凍組表型培養(yǎng)14 后。C:所有對(duì)照組表型培養(yǎng)14 后,D:所有增殖。E:自體免疫淋巴細(xì)胞。

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